7月29日 星期二 晴
夜，刚刚还藏在墙角青苔深处，现在已经偷偷溜了出来，占据了草木葱郁的趵突泉校区。
我坐在实验室，望着窗外的幽幽夜色。送走了来济南玩的两个小伙伴，留校生活又恢复了往日的宁静。转头看看摇床上缓慢摇动的试剂盒，PVDF膜在乳白色的封闭液中摇摆浮沉。希望这次膜上能够清晰呈现样品中CDNF量的情况。
最近两周，我们实验小组在学习运用蛋白印迹技术比较不同实验样品中一种名为CDNF的新型神经营养因子含量的差异。主要是通过特异性抗体，对凝胶电泳处理过的生物样品进行显影，分析显影位置与其灰度，以确定特定蛋白在组织中的表达情况。
从配胶灌胶与处理样品到上样与电泳，到转膜、封闭与一抗孵育，再到隔夜后的二抗孵育与蛋白检测，完成一批样品的检测过程大致需要一天半的时间。中间若有某个地方没处理好，最后的曝光影像可能会是模糊一片。尽管我们在不断地调整摸索实验条件，然而这几次CDNF的曝光影像还是有点太写意。内参蛋白actin的曝光条带清晰且背景干净，然而CDNF的那块膜却像信笔涂鸦的一样，一大片模糊不清。
问题出在哪里呢？第一次看到CDNF的“写意画”时，我们着实吃了一惊。这不科学啊，明明应该没有什么操作失误。我们开始反思、分析，膜上的那一片显影区域应该是结合了相应抗体的部位，只是结合区域似乎大了点（同种蛋白电泳后往往呈条带状分布），看来似乎存在非特异性结合。由于直到转膜完成为止，内参蛋白与待测蛋白CDNF的作用条件完全相同，我们判断问题出在此后的封闭与抗体孵育。
是不是抗体作用后清洗不够彻底？第二次，我们增加了抗体作用后TBST清洗的次数与时间，然而显影结果如故；是不是封闭液封闭效果不佳？查阅资料后，就在上一次，我们优化了封闭液，显影后看到的却还是一朵云彩……
问题应该是在抗体了，而内参与CDNF的二抗作用条件也完全相同，矛头直指CDNF抗体。于是，在老师的指导下，这一次我们进一步调整了封闭液的作用条件并改进了一抗溶液组分。根据明天的结果，下一步或许要检测下CDNF抗体的特异性如何了。
实践过程中，我发现在实验室做实验不是机械地反复重复，而是在思考中进行不断探索与优化，深入了解与诠释各种有趣的现象。很多时候，实验结果并不与预期相符，甚至有时或许恰恰相反。我们该做的不是郁闷忧伤与盲目重复，而应当分析原因、改进完善，在实验中不断学习知识、积累经验。
“问渠哪得清如许，为有源头活水来”。动手去实践，用自己的双手与头脑去探索和发现未知，这才是实验的魅力所在！
我又转头看了看我们的PVDF膜，期待着明天的显影结果。
初审编辑：陈新
责任编辑：大众网山大记者站
责任编辑：大众网山大记者站
本文相关新闻
网友评论[点击评论]
